Вредные привычки при SDS PAGE В разных городах и лабораториях приходится видеть одни и те же ненужные процедуры при постановке вертикального электрофореза. Иногда это просто стремление усложнять то, что можно делать проще. А иногда это принимает вид закрученных карго-культов (например, выравнивание форезной камеры, чтобы "полоски шли ровно"). Итак, какие вредные привычки можно исправить? Протирка стекол салфетками и сушка на салфетках Какие бы салфетки ни были безворсовыми, от них все равно остаются ворсинки. Гораздо лучше промыть стекла детергентом, ополоснуть водопроводной водой и дистиллятом и сушить вертикально в сушилках (их очень просто изготовить в лаборатории). Для ускорения процесса можно дополнительно ополоснуть спиртом. Стекла получаются чистыми. Проверка герметичности кассеты водой Это классика: высушить стекла, собрать кассету и все смочить водой. Да, бывает, что заливочный столик протекает. На мой взгляд, при протечках нужно устранять причину, а не бороться с последствиями. Одной из частых причин протечек является то, что пружина столика со временем ослабевает и недостаточно сильно прижимает стекла к прокладке. Существует как минимум три способа решения проблемы. Первый, самый простой, купить новый столик (ну вы понимаете). Второй, карандашный способ, вставить карандаш в рычаг. И третий, кардинальный, разобрать столик, растянуть пружину и собрать заново. Про карандашный способ и растягивание пружины я рассказывал здесь. Красить гели медленно Гели можно красить и отмывать быстро, если подогреть раствор в микроволновке. Для отмывки также лучше использовать горячий раствор и волшебное средство - салфетки. Они впитывают кумасси, и процесс отмывки ускоряется. Красить гели слишком концентрированным раствором Если раствор красителя слишком концентрированный, фон сильно прокрашивается и отмывка занимает больше времени. Умеренность в выборе концентрации (~0,01% достаточно) сэкономит время. Или можно перейти на коллоидный кумасси: фон практически не окрашивается, и отмывка не требуется. Я писал про интересную работу немецких исследователей по сравнению составов красителей. Простой рецепт коллоидного красителя: 0,05% кумасси G250, 2%фосфорной кислоты и 6% сульфата аммония (сульфат аммония добавить последним, после растворения кумасси). Доводить pH электродного буфера Встречается редко, но иногда это делают. У корректно приготовленного электродного буфера после смешивания компонентов pH может быть в пределах 8.2-8.4, и это нормально. Нет необходимости измерять его после приготовления: преумножая знания, преумножаете печаль (или можно купить готовый концентрат и не беспокоиться). Готовить много акриламида/бис Раствор акриламида/бис со временем разлагается с образованием акриловой кислоты, что влияет на разрешение при электрофорезе. Поэтому лучше не готовить большие объемы, а делать запас на месяц-два работы. Как вариант, можно купить готовый раствор Bio-Rad: он приготовлен в ультрачистых условиях и более стабилен, чем самодельный. Готовить каждый раз свежий APS Да, свежеприготовленный раствор персульфата аммония работает лучше всего. Но, во-первых, порошок должен храниться в сухом месте, так как он склонен к обводнению. Во-вторых, это лишняя работа: 10% раствор спокойно хранится в морозильнике до года. Хранить электродный буфер в холодильнике Электродный буфер расходуется быстро и не требует особых условий хранения. Нет смысла занимать место в холодильнике, тем более что SDS на холоде выпадает в осадок. В некоторых случаях это может быть оправдано, например при зимографии. Но и здесь проще разводить концентрат охлажденной водой. Update. Забыл добавить про наслаивание бутанола и изобутанола. Эти спирты неприятно пахнут, а самое важное - пластиковые компоненты столиков для заливки камер Mini Protean не совместимы с изобутанолом и н-бутанолом. Эти привычки идут с древних времен, когда компоненты форезных камер изготовлялись из других материалов. Лучше воду, этанол или изопропанол. Мой выбор - 0,1% SDS в воде, и поверх